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本制品由6条不同长度的单链DNA分子混合而成，6个条带的大小为15，40、60、80、100、120nt，其中80nt浓度为0.4μg/μL，其余条带浓度为0.2μg/μL。

单链DNA Ladder(15～120nt)适用于跑尿素变性胶，电泳后使用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒，核酸PAGE电泳染色试剂盒、核酸快速染色试剂盒或RealGood类核酸染料染色均可以得到清晰的条带分离效果。

• 凝胶制备
  
  • 可以选择DNA尿素PAGE电泳试剂盒或按照以下程序制胶：
    表一、TBE-尿素PAGE分离胶配方表(总体积5mL，适用于厚度1.0mm小板胶)
    

    单链DNA长度	最佳凝胶浓度	尿素	40% PAA(29:1)	5×TBE	补水到总体积	10% APS	TEMED
    200～1000nt	5%	2.1g	0.625mL	1mL	5mL	50μL	5μL
    50～400nt	8%		1mL
    30～300nt	10%		1.25mL
    10～150nt	15%		1.875mL

    最后加入10%APS和TEMD后，立即混匀。
    
  • 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1～5cm的水层，使凝胶表面保持平整。
    
  • 静置10～20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
    
    • 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
  • 去除覆盖在分离胶上的水层；按照表二将不同体积成分在一个小烧杯中混合；最后加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
    表二、TBE-尿素PAGE 4%浓缩配方表(总体积2mL，适用于1.0mm厚度胶)
    

    凝胶浓度	尿素	40% PAA(29:1)	5×TBE	灭菌水	10% APS	TEMED
    4%	0.84g	0.2mL	0.4mL	补水至体积2mL	20μL	2μL

  • 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端；将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
    
  • 静置30～60分钟，等待浓缩胶聚合。
    
    • 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
• 样品制备
  
  • 取适量体积单链DNA Ladder样品，70℃处理5分钟，冰浴制冷后待上样；待测样品序与2×TBE尿素上样缓冲液等体积混合后70℃处理5分钟，冰浴制冷后待上样。
• 电泳
  
  • 预电泳（可选）：电泳槽内外加入适量1×TBE缓冲液稳压200 V预电泳30分钟。电泳结束后，用1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2～3次，去除残余的尿素。
    
  • 上样：根据梳齿确定Marker上样量，一般是10齿1mm厚梳子上样5μL，15齿1mm厚梳子上样3μL。
    
  • 连接电源线，打开电源开关，按照以下条件电泳。
    

    恒电压	起始电流	结束电流	电泳时间	适用条件
    200V	15-20mA/板胶	10-15mA/板胶	60+ min	最佳电压，最优的分辨率

  • 等待上样缓冲液的溴酚蓝指示前沿到凝胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续实验。
    

    变性胶浓度	溴酚蓝	二甲苯菁
    5%	35nt	130nt
    8%	19nt	75nt
    10%	15nt	55nt
    15%	8nt	42nt

• 染色
  
  • 使用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒(货号：RFT204)，核酸PAGE电泳染色试剂盒(货号：RFT205)或核酸快速染色试剂盒(货号：RFT206)染色均可以得到清晰的条带分离效果。
    
    • 如果使用核酸染料染色，RealGood Red(货号：RFT232)或RealGood All(货号：RFT270)核酸染料结合单链核酸效果最佳，强烈建议使用以便获得最佳效果的胶图。其余染料如GelRed，Goldview，EB等染色效果不好。